Medyczna fundacja dantis

Anafilatoksyna C5a jest głównym regulatorem aktywujących względem hamujących FcyR w chorobie płuc indukowanej przez kompleks immunologiczny cd

10 września 2019 by admin

Całkowity RNA przygotowano z komórek BAL-AM wskazanych myszy w 2 godziny po traktowaniu IC / rhC5a przy użyciu odczynnika RNAzol (WAK-Chemie Medical GmbH, Steinbach, Niemcy). Poziomy ekspresji mRNA FcyR / C5aR znormalizowane do tubuliny oceniano ilościowo za pomocą RT-PCR TaqMan w czasie rzeczywistym, stosując opublikowane startery FcyRII, FcyRIII i a-tubuliny lub następujące startery i sondy swoiste dla FcRc / C5aR: FcR ., sens 5. -ATCTTGTTCTTGCTCCTTTTGGTG-3. i antysensowny 5 (3-GCATCCAGGATATAGCAGAGCTG-3; sonda, 6-FAM-AGCA-GCCGCCCTGGGAGAGC-TAMRA; C5aR, sens 5. – TGT-GGGTGACAGCCTTCGA-3. i antysensowny 5 (3-CCGCCAGA-TTCAGAAACCAG-3; i sondę, 6-FAM-CCAGACGGG-CCGTCAAACGC-TAMRA (21, 37, 38). Analiza funkcjonalna makrofagów pęcherzyków płucnych in vitro. Mysie pęcherzykowe makrofagi MH-S (36) eksprymujące zarówno C5aR jak i FcyR w RT-PCR i analizę FACS utrzymywano w 10% pożywce zawierającej FCS / RPMI 1640 zawierającej suplementy. W doświadczeniach funkcjonalnych, 106 adherentnych komórek MH-S inkubowano przez 24 godziny w sześciu studzienkach do hodowli tkankowej zawierających pożywkę 1% FCS / RPMI 1640 i aktywowano albo 100. G / ml agregowanej cieplnie IgG (mysiej IgG1), jak opisano wcześniej (21). ) lub 50 ng / ml rekombinowanej ludzkiej C5a (Sigma-Aldrich) lub kombinacji obu bodźców. Po różnych punktach czasowych (0, 2, 4, 6, 8 i 16 godzin), odpowiednie rozcieńczenia supernatantów hodowli z nietraktowanych i stymulowanych komórek MH-S badano pod kątem wytwarzania TNF-a. i MIP-2 za pomocą testu ELISA. Całkowity RNA został przygotowany i zanalizowany pod względem ekspresji mRNA C5aR, FcsRI i TNF-a oraz MIP-2 za pomocą RT-PCR TaqMan w czasie rzeczywistym (TNF-a, sens 5. -GTGACCA-GGCTGTCGCTACA-3. I antysensowny 5. – AGGGCAATTAC-AGTCACGGC-3a, sonda, 6-FAM-ACTGAACCTCTGCTCCCCACGGG-TAMRA, MIP-2, sens. 5a-TGTGACGCCCCT-AGGA-3a i antysensowna 5a-TTTGACCGCCCTTGAGAGTG-3 (3, sonda, 6-FAM-CCCACTGCGCCCAGACAGAAGTCA-TA -TAMRA) (39, 40). Analiza statystyczna. Analizę statystyczną przeprowadzono przy użyciu pakietu statystycznego SPSS V. 9.0 (SPSS, Chicago, Illinois, USA). Aby przeanalizować różnice w wartościach średnich między grupami, zastosowano dwustronny niesparowany test Studenta. Wyniki Upośledzona reakcja nadwrażliwości płucnej u myszy z mutacją C5aR i FcyRIII. Reakcję nadwrażliwości indukowano przez prowokację OVA: przeciw-OVA IgG IC w płucach myszy C57BL / 6 bez C5aR (C5aRc / a) i FcyRIII (FcyRIIIa / p), a następnie w badaniach kinetycznych przez pomiar MPO tkanki płuc jako marker śródmiąższowego napływu PMN (Figura 1a), przez analizę BALF dla akumulacji PMN w pęcherzykach płucnych (Figura 1b) i przez oznaczenie ilościowe czerwonych krwinek w BALF, wskazując stopień krwotoku płucnego (Figura 1c). Znaczące objawy zapalenia indukowane przez IC ujawniono po raz pierwszy po 4 godzinach, osiągając maksymalne poziomy w 8 do 24 godzin u myszy kontrolnych WT C57BL / 6 dla wszystkich tych parametrów. W Fc. RIII. /. myszy, rekrutacja śródmiąższowych PMN i krwotoków znacznie spadła i była porównywalna do obserwowanej w C5aR. /. zwierzęta po 4 i 8 godzinach, z obniżeniem poziomów tła po 24 godzinach u obu szczepów myszy (Figura 1, a i c). Migracja pęcherzykowego PMN różniła się tym, że atenuacja zmutowanych myszy FcsRIII była znacznie bardziej zmniejszona u myszy zerowych C5aR po 4 godzinach (FcyRIIIa / a vs. C5aR2 / a: 1,61, 0,32 x 105 PMNs vs. 0,92. 0,18 X 105 PMN, n = 7. 19, P <0,05), ale mniej głębokie po 8 godzinach (FcyRIIIa / a vs. C5aRa / a: 6,25 x 2,54 x 105 PMNs wobec 11,54. 1,79 x 105 PMN; n = 7 . 10, P = 0,10) i 24 godziny (FcyRIIIa / a vs. C 5aRa / a: 2,17 x 1,41 x 105 PMN wobec 7,41 a 1,65 x 105 PMNs, n = 7, 9, P <0,05; 0,05) (rysunek 1b). Wyniki te sugerują, że C5aR i FcyRIII są krytycznymi efektorami zapalenia płucnego układu oddechowego i, zgodnie z opublikowanymi danymi (14, 35), mogą wskazywać, że C5aR ma większy udział w początkowych zdarzeniach naciekania neutrofili w patologii płuc indukowanej przez IC. Figura 1Autacja indukowanego przez IC uszkodzenia płuc przez C5aR i niedobór FcyRIII. C57BL / 6 WT (wypełnione koła), FcyRIIIa /. (wypełnione kwadraty) i C5aR. /. (wypełnione trójkąty) myszy otrzymywały dożylnie 150 .g anty-OVA Ab wewnątrz dotchawicznie i 20 mg / kg OVA Ag, a odpowiedź zapalną w płucu pozostawiono na 2 do 24 godzin (IC). Myszy nie otrzymujące OVA Ag służyły jako kontrole Ab (puste kółka). We wskazanych czasach myszy były zabijane i oceniano akumulację PMN w tkance płucnej (a), napływ PMN w przestrzeni pęcherzykowej (b) i krwotok (c). Wyniki są wyrażone jako średnie. SEM (n = 7. 18 myszy dla każdej grupy). Różnice w wylewach krwi do klatki piersiowej oraz w naciekach pęcherzyków płucnych i śródmiąższowych PMN były znaczące (P <0,05) w grupie leczonej IC myszy WT w porównaniu z FcyRIIIa / r. i C5aR. /. myszy po 4, 8 i 24 godzinach. Fc. RIII. /. i C5aR. /. myszy różniły się istotnie tylko w przypadku pęcherzyków płucnych PMN (patrz tekst) [podobne: olej z siemienia lnianego, tatuowanie gałek ocznych, olej z ostropestu właściwości ] [patrz też: anielskie smaki, fundacja dantis, szybkowar czas gotowania ]

Posted in: Bez kategorii Tagged: anielskie smaki, fundacja dantis, szybkowar czas gotowania

Partnerzy serwisu:



Zobacz tez:

Rozwój cukrzycy typu 2 po opóźnieniu wzrostu wewnątrzmacicznego u szczurów wiąże się z progresywnym wyciszaniem epigenetycznym Pdx1 ad 8

Związane kompleksy eluowano z białka A za pomocą 1% buforu SDS, a wiązania poprzeczne odwracano w obecności Rnazy A i intensywnie trawiono proteinazą K. Uwolnione DNA ekstrahowano, wytrącano i ponownie zawieszano w wodzie. Sekwencje DNA w wejściu. a próbki IP określano ilościowo względem siebie metodą PCR w czasie rzeczywistym (startery są wymienione w Tabeli dodatkowej ... [Read more...]

Nowy transgeniczny mysi model do immunologicznej oceny szczepionek na bazie minigenu DNA na bazie antygenu rakowo-płodowego ad 6

Zgodnie z naszą wiedzą, nasze badanie jako pierwsze wykorzystało podwójnie transgeniczne myszy CEA-A2Kb do takich badań in vivo. Przetestowaliśmy dwa różne epitopy CEA ograniczone przez HLA-A2 . z naszymi szczepionkami minigenowymi DNA: CAP1-6D (YLSGADLNL) (9, 17) i CEA691 (IMIGVLVGV) (15). Szczepionka minigene DNA pHI-691 wyraźnie indukowała istotną odpowiedź CTL swoistą dla HLA-A2y, podobną do odpowiedzi ... [Read more...]

Zależna od leptyny agregacja płytek i zakrzepica tętnicza sugerują mechanizm powstawania zakrzepicy w przebiegu otyłości cd

W przypadku zmiennych ciągłych różnice między medianami były testowane za pomocą testu nieparametrycznego Manna-Whitneya lub testu Kruskala-Wallisa, a następnie testu wielokrotnych porównań Dunna. Aby porównać odpowiedź zakrzepową różnych grup myszy, naczynia myszy, które tylko przejściowo okludowały się lub nie zamykały całkowicie po uszkodzeniu FeCl3, uznawano za mające czasy do zakrzepicy odpowiadające końcowi okresu monitorowania przepływu ... [Read more...]

DevURL

Polecane:

korekta prac magisterskich

Tags

anielskie smaki badanie synonim centrum medyczne białystok choroba synonim dantis dokumenty synonim fundacja dantis fundacje lublin gorączka cda jako synonim jednakże synonim mycie włosów szarym mydłem olej z ostropestu właściwości olej z siemienia lnianego powiększone serce przyczyny sanatorium nad morzem dla dzieci szybkowar czas gotowania słód jęczmienny gdzie kupić tatuowanie gałek ocznych wskazuje synonim wypadek przy pracy dokumenty zus dobrowolne ubezpieczenie zdrowotne

Copyright © 2021 Medyczna fundacja dantis.