Medyczna fundacja dantis

Mediacja sygnalizacji ERK1 / 2 ratuje wrodzone wady serca w mysim modelu zespołu Noonana ad 7

13 września 2019 by admin

Q79R SHP2 wytworzono z cDNA WT SHP2 przy użyciu mutagenezy opartej na PCR. Następnie, WT i Q79R SHP2 umieszczono w promotorach a- i P-MHC i wygenerowano myszy Tg. Sekwencje PCR stosowane do genotypowania były następujące: sens 5 (3-GGTCATGCGTGTTAGGAAC-3 (3, antysensowny 5 (3 -TTGTCTGGTCCACCAAGGAATAC-3 .. Wszystkie linie Tg i myszy ukierunkowane na geny wykonywano w lub krzyżowano wstecznie na tle FVBN przez co najmniej 7 pokoleń przed zastosowaniem w analizowanych krzyżówkach. Histologia i immunohistochemia. Wszystkie serca używane do histochemii utrwalono w stanie odprężonym przez wlew 4% formaldehydu w buforze kardioplegowym (50 mM KCl w 5% dekstrozie) z prawego przedsionka, podczas gdy serce nadal biło. Następnie serca utrwalono 4% paraformaldehydem w PBS przez noc, zatopiono w parafinie, podzielono na 5. M grubości i wybarwiono H & E i trichromem Massona. Zastosowane skrawki analizowano według ścisłych kryteriów diagnostycznych: obecność defektów przegrody międzyprzedsionkowej / VSD określono tylko w sekcjach, w których przegrody między przedsionkiem, przegrody międzykomorowej i podstawy mięśnia sercowego obu komór były obecne w jednej płaszczyźnie. Sekcje używane do ilościowego oznaczania niekomoracji komór były we wszystkich przypadkach dokładnie w środkowej części serca, gdzie obszary jamy prawej i lewej komory były największe, a wszystkie ulotki zarówno zastawki mitralnej, jak i zastawki trójdzielnej były widoczne w tej samej płaszczyźnie. Te kryteria cięcia zapobiegły wszelkim artefaktom, które mogą wynikać z ukośnego kąta cięcia. Kryteria diagnostyczne odpowiadają widokowi komory płucnej. stosowany podczas USG klinicznego. Wszystkie serca były całkowicie i kolejno dzielone (grubość 5. M): co najmniej 4 serca dla każdej linii podzielono w ten sposób i podzielono 3 sekcje dla każdego serca. Korzystając z tych przekrojów, wyznaczono całą wolną ścianę lewej i prawej komory przy użyciu MetaMorph (wersja 6.3, Molecular Devices). Wyrysowano prostokąt obejmujący całą wolną ścianę i określono liczbę pikseli w mięśniu sercowym (pomarańczowym, fig. 4C). Wskaźnik zagęszczenia został następnie zdefiniowany jako obszar pomarańczowego regionu podzielony przez obszar obszaru zainteresowania. Korzystając z tej metody, uzyskaliśmy wysoce powtarzalne wyniki w porównaniach serc z tej samej grupy. Serce zostało zdefiniowane jako nieskomplikowane, jeśli wartość jego wskaźnika spadła o 2 SD poniżej wskaźnika uzyskanego z co najmniej 5 Ntg serc w tym samym wieku. W przypadku immunohistochemii, zarodkowe serca utrwalono przez noc w 4% paraformaldehydzie w PBS w 0 ° C i zatopiono w OCT, jak opisano wcześniej (64), a wycinki 5. M wycięto z zamrożonego bloku. Użyto pierwotnych przeciwciał: (a) kozie anty-SH-PTP2 (rozcieńczenie E-20; 1: 100; Santa Cruz Biotechnology Inc.) w celu identyfikacji SHP2; (b) króliczą anty-rozszczepioną kaspazę-3 (rozcieńczenie 1: 100, technologia sygnalizacji komórkowej); (c) królicze anty-Ki-67 (rozcieńczenie 1: 1000, Abcam) w celu zbadania proliferacji kardiomiocytów. Osioł przeciw osiołom Alexa Fluor 488 lub kozie anty-królika Alexa Fluor 568 (rozcieńczenie 1: 100, Molecular Probes, Invitrogen) zastosowano jako przeciwciało drugorzędowe. Jądra barwiono TO-PRO-3 (rozcieńczenie 1: 200, Molecular Probes, Invitrogen) przez 20 minut. Analiza białek. Ekstrakty białkowe przygotowano z homogenatów mięśnia sercowego pochodzących z 5 zarodkowych serc 5 (przy E16.5) i 20 (przy E9.5). Próbki komorowe homogenizowano na lodzie w buforze RIPA z 1% koktajlem inhibitora fosfatazy (Sigma-Aldrich). Homogenaty odwirowano (8000 gw ciągu 10 minut w 4 ° C), a supernatant zmieszano z buforem ładującym SDS-PAGE, a następnie zagotowano i odwirowano. Zastosowano następujące przeciwciała: SH-PTP2 (C-18), MYPT1 (rozcieńczenie 1: 500, Santa Cruz Biotechnology Inc.), p44 / 42 MAPK, fosfo p44 / 42 MAPK, p38, fosfo-p38, JNK1 / 2. fosfo-JNK1 / 2, ERK5, fosfo-ERK5, Akt, Ser473-fosfo-Akt, STAT1, fosfo-STAT1, STAT3, fosfo-STAT3, fosfo-STAT5, kaspaza-3 (rozcieńczenie 1: 1000, technologia sygnalizacji komórkowej) fosfo-MYPT1 i STAT5B (rozcieńczenie 1: 3000, Upstate, Millipore) i GAPDH (rozcieńczenie 1: 300, Chemicon, Millipore). Wiązanie pierwotnego przeciwciała wizualizowano przez wtórne przeciwciała skoniugowane z HRP i wzmocnioną chemiluminescencję (Amersham, GE Healthcare). Niefosforylowane i ufosforylowane gatunki wizualizowano i oceniono ilościowo w Storm PhosphorImager (Molecular Devices, GE Healthcare Life Sciences). RT-PCR. Trzy mikrogramy RNA poddano reakcji RT, a otrzymany cDNA uzyskano przy użyciu SuperScript III (Invitrogen), jak opisano poprzednio (64). Analizę PCR znaczników różnicowania przeprowadzono przy użyciu ich swoistych starterów
[podobne: miód gryczany zastosowanie, szybkowar czas gotowania, badanie synonim ]
[patrz też: badanie synonim, olej z ostropestu właściwości, słód jęczmienny gdzie kupić ]

Posted in: Bez kategorii Tagged: badanie synonim, olej z ostropestu właściwości, słód jęczmienny gdzie kupić

Partnerzy serwisu:



Zobacz tez:

Nefritogenne mAb 5-1-6 jest skierowane na zewnątrzkomórkową domenę szczurzej nefryny ad

W opisywanych tu badaniach wykazaliśmy, że reaktywne monoklonalne mAb 5-1-6 reaktywne wobec przepony szczelinowej identyfikuje zewnątrzkomórkową domenę nefryny, tym samym dokumentując znaczenie szczelinowo-przepony i jej składnika, nefryny, w regulacji permerelektywności kłębuszkowej . Metody Przeciwciała. Płyn puchlinowy zawierający mAb 5-1-6 wytworzono u myszy otrzymujących primant 2,6,10,14-tetrametylopentadekanu (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri, USA) i wstrzyknięto dootrzewnowo ... [Read more...]

Epidermalny HLA-DR i poprawa reaktywności skórnej na toksyny superantygenowe w łuszczycy

Paciorkowiec i superantygeny gronkowcowe (SAg. S) są zaangażowane w patogenezę zapalnych chorób skóry, ale mechanizmy działania tych toksyn są nieznane. W niniejszym badaniu oceniano zdolność nanogramów do stosowania miejscowego, oczyszczonego toksycznego zespołu wstrząsowego, toksyny-1 (TSST-1), enterotoksyny gronkowcowej typu B oraz enterotoksyny pirogennej typu A i C ze streptokoków w celu wywołania reakcji zapalnych w klinicznie ... [Read more...]

Nefritogenne mAb 5-1-6 jest skierowane na zewnątrzkomórkową domenę szczurzej nefryny

mAb 5-1-6 identyfikuje antygen na szczelinowych przeponach szczurzego podocytu i indukuje ciężką białkomocz po wstrzyknięciu szczurom. Nefryna, białko transbłonowe podobne do Ig, które jest zmutowane w wrodzonym zespole nerczycowym typu fińskiego, zostało zlokalizowane w szczelinowo-przeponowej na ludzkich podocytach. Tutaj dokumentujemy, że antygen mAb 5-1-6 jest nefryną szczurzym. Po inkubacji glomeruli szczura z tym mAb, kompleks ... [Read more...]

DevURL

Polecane:



Tags

anielskie smaki badanie synonim centrum medyczne białystok choroba synonim dantis dokumenty synonim fundacja dantis fundacje lublin gorączka cda jako synonim jednakże synonim mycie włosów szarym mydłem olej z ostropestu właściwości olej z siemienia lnianego powiększone serce przyczyny sanatorium nad morzem dla dzieci szybkowar czas gotowania słód jęczmienny gdzie kupić tatuowanie gałek ocznych wskazuje synonim wypadek przy pracy dokumenty zus dobrowolne ubezpieczenie zdrowotne

Copyright © 2021 Medyczna fundacja dantis.