Dla każdego panelu analizowano co najmniej 5 serc. We wszystkich panelach orientacja jest apikalna po prawej i po lewej stronie. (D) Reprezentatywne zdjęcie serca z niewydolnością serca końcowego w myszy. -MHC Q79R (6 tygodni, oryginalne powiększenie,. 2,8). W porównaniu z myszami z miotu Ntg, serca a-MHC Q79R wykazywały zarówno poszerzenie przedsionkowo-komorowe, jak i nienormalną anatomię rowków międzykomorowych (*). Niedoczynność lewej komory powodowała niedomykalność w kierunku lewego przedsionka, powodując masywne skrzepliny. (E i F) Analizy stosunku masy ciała do masy ciała (HW / BW) i stosunku masy płuc do masy ciała (LW / BW) u myszy dopasowanych do wieku i płci (3 miesiące po urodzeniu, n = 8 [4 mężczyzn , 4 kobiety]). Stosunki HW / BW i LW / BW wzrosły u myszy P-MHC Q79R. * P <0,005. Następnie przeanalizowaliśmy wpływ ekspresji SHP2 na funkcje i losy serca u tych myszy. Badanie echokardiograficzne ujawniło, że serca. -MHC Q79R wykazywały znacznie zmniejszoną kurczliwość i grubość ściany komór, podczas gdy czynność serca była prawidłowa u myszy. -MHC WT,. -MHC Q79R i. -MHC WT (Tabela 1). Niewydolność serca u myszy. -MHC Q79R spowodowała zastoinową niewydolność serca (Figura 2D). Zwierzęta zazwyczaj prezentowały zwłokę z rozszerzeniem przedsionkowym i komorowym, przewlekłym skrzepliną lewego przedsionka i nieprawidłową anatomią rowka śródkomorowego. Stosunek ciężaru serca do masy ciała (HW / BW) i stosunku masy do masy ciała (LW / BW) był zwiększony (Ryc. 2, E i F). W myszach y-MHC Q79R, 38,8% (19 z 49) zmarło o 8 miesięcy, podczas gdy wszystkie Ntg (n = 32), a-MHC WT (n = 37), (3-MHC Q79R (n = 50), i. -MHC WT (n = 32) myszy przeżyły. Tabela Funkcjonowanie serca u myszy P- i P-MHC SHP2 Ekspresja Q79R SHP2 selektywnie aktywuje ERK1 / 2. SHP2 reguluje wewnątrzkomórkowe szlaki sygnałowe, które pomagają kontrolować proliferację, różnicowanie, migrację, adhezję i przeżycie komórek (15) poprzez modulowanie kaskad MAPK (21. 24). Przeanalizowaliśmy zatem kilka kandydatów w dół szlaków sygnałowych do aktywacji przez mutację Q79R SHP2 podczas ciąży. Zgodnie z poprzednimi danymi in vitro (19), gałąź ERK1 / 2 była hiperfosforylowana w sercach a-MHC Q79R (Figura 3A i Tabela Uzupełniająca 1), ale nie w sercach P-MHC Q79R (dane nie przedstawione) podczas ciąży, zgodna z aktywność 2 promotorów podczas rozwoju serca (25). Hiperaktywacja ERK1 / 2 utrzymywała się przez drugą połowę ciąży w sercach P-MHC Q79R (Figura 3, Bd). Następnie zbadaliśmy ERK1 / 2 w sercach dorosłych. -MHC Q79R i zapytaliśmy, czy ekspresja zmienia się zgodnie z dysfunkcją serca. Co ciekawe, aktywacja ERK1 / 2 została obniżona po urodzeniu nawet w wadliwych sercach (Figura 3B, po prawej). ERK1 / 2 był hiperfosforylowany w sercach P-MHC Q79R w 3 miesiące (Figura 3A), co sugeruje, że aktywność sygnalizacyjna odpowiada ekspresji SHP2, ale wydaje się, że przewlekła aktywacja tego szlaku w kardiomiocytach po organogenezie serca jest w dużej mierze łagodna, ponieważ te myszy miał normalną długość życia, zachowaną funkcję serca (tabela 1) i brak patologii (ryc. 2). Pozostałe kaskady MAPK, w tym p38, JNK1 / 2 i ERK5, nie były aktywowane (Figura 3A i Tabela uzupełniająca 1). Doniesiono, że SHP2 może również uczestniczyć w przeżywaniu komórek, migracji, adhezji i miogenezie poprzez przekazywanie sygnałów przez szlaki Akt, JAK / STAT lub RhoA (26-29). Jednakże ekspresja tych białek lub odpowiednich efektorów (Akt, STAT1, -3, -5 i MYPT) była niezmieniona w populacji kardiomiocytów (Figura 3A i Tabela Uzupełniająca 1). Figura 3 Wyrażenie QSH Q79R powoduje hiperfosforylację ERK1 / 2. (A) Western blot ścieżek sygnałowych potencjalnie poniżej SHP2. ERK1 / 2 jest hiperfosforylowany w sercach P-MHC Q79R (E16.5) i A-MHC Q79R (3 miesiące). Fosforylowane gatunki oznaczono ilościowo i wartości podane w Tabeli dodatkowej 1. (B) ERK1 / 2 jest hiperfosforylowany przez całą drugą połowę ciąży w sercach P-MHC Q79R, ale to nie występuje po urodzeniu, gdy promotor (3-MHC jest nieaktywny. . Wszystkie ścieżki zawierały zebrane białka z co najmniej 5 serc. Ilościowe przedstawienie plam przedstawiono w Tabeli dodatkowej 1. (C i D) Ocena ilościowa odpowiednio p-ERK1 i p-ERK2. Bloty przedstawione w B oznaczono ilościowo przy użyciu Storm PhosphorImager, jak opisano w Methods. CHF, zastoinowa niewydolność serca; NF, niewymagające. Zmniejszenie hiperfosforylacji ERK1 / 2 w sercach a-MHC Q79R. Zarówno ERK1, jak i ERK2 są szeroko wyrażane w trakcie opracowywania (30). Aktywacja ERK1 / 2 jest wymagana do embriogenezy (31), z czasem trwania i wielkością aktywności ERK różniących się między typami komórek (32) [podobne: szybkowar czas gotowania, badanie kału na pasożyty, wegetariańskie przekąski ] [więcej w: lekarz medycyny pracy wrocław, olej z siemienia lnianego, centrum medyczne białystok ]
