Medyczna fundacja dantis

Nefritogenne mAb 5-1-6 jest skierowane na zewnątrzkomórkową domenę szczurzej nefryny ad 5

12 września 2019 by admin

Po odbarwieniu 30% metanolem, przesunięty w górę pasek wycięto i poddano proteolitycznemu trawieniu w welu za pomocą trypsyny. Jako kontrolę prążek 150 kDa odpowiadający nieskompleksowanemu mAb 5-1-6 został wycięty i przetworzony podobnie. Zarówno pasma kontrolne, jak i przesunięte w górę były analizowane przez MS (przez TA Addona i KB Charron). Zgodnie z oczekiwaniami zidentyfikowano kilka peptydów IgG w kompleksie o wielkości 300 kDa. Ponadto zidentyfikowano pojedynczy peptyd o długości 10 aminokwasów (LDVHYAPTIR) o pełnej identyczności z sekwencją w zewnątrzkomórkowej domenie opublikowanej sekwencji ludzkiej nefryny (Figura 2). Na koniec zidentyfikowano pojedynczy peptyd o homologii z szczurzym aktyną w kompleksie o wielkości 300 kDa. Analizowano wszystkie widma MS / MS i nie zidentyfikowano żadnych innych istotnych sekwencji białkowych. W szczególności, sekwencja nefryny była jedynym obecnym transbłonowym białkiem. Tylko sekwencje IgG uzyskano z pasma 150 kDa mAb 5-1-6. Figura 2Schematyczne przedstawienie nefryny wykazujące pochodzenie sekwencji peptydowych zidentyfikowanych przez MS / MS w immunoprecypitatach glomeruli szczura. Sekwencję powyżej nefryny uzyskano z usieciowanego immunoprecypitatu, a 2 poniżej zidentyfikowano z plamy żelu 2D o masie cząsteczkowej 185 kDa. Odpowiednią sekwencję ludzką zaznaczono kursywą. Strzałka uwydatnia niedopasowanie pojedynczego aminokwasu między sekwencją pochodną MS / MSa a sekwencją ludzką. W schemacie nefryny, ponumerowane czarne regiony wskazują domeny Ig-podobne; FN, domena podobna do fibronektyny typu III; M, domena transbłonowa; i C, domena cytoplazmatyczna. W celu specyficznego wyizolowania białka będącego przedmiotem zainteresowania i uproszczenia analizy MS / MS, rozdzieliliśmy immunoprecypitat mAb 5-1-6 za pomocą elektroforezy żelowej 2D. W warunkach redukujących DTSSP ulega rozszczepieniu, a kompleks ulega dysocjacji na poszczególne składniki. Figura 3 pokazuje wybarwiony srebrem żel 2D immunoprecypitatu mAb 5-1-6 z jego kontrolą dla porównania. Plamka jest wyraźnie widoczna tuż poniżej markera 220 kDa z pI 4,95 . 5,2 w żelu 5b do mAb 5b. Żadne inne swoiście zabarwione obszary nie zostały zidentyfikowane w żelu 5b mAb 5. I żadne równoważne miejsce nie było obecne w żelu kontrolnym. Identyczny, ale słabszy punkt obserwowano przy 185 kDa w niebieskim żelu Coomassie z drugiego eksperymentu (nie pokazano). Plamkę o masie 185 kDa wycięto z wybarwionego srebrem żelu, wraz z odpowiednim obszarem z żelu kontrolnego i analizowano za pomocą LC-MS / MS po wszczepieniu proteolitycznym w żelu trypsyną. Dwa peptydy zidentyfikowano poprzez dopasowanie bazy danych z pasma żelu 185 kDa. Jeden peptyd miał 100% identyczności sekwencji z ludzką nefryną (VAAAGDSTSSATLHCR). Zaobserwowano, że drugi peptyd wykazuje silną homologię z inną sekwencją ludzkiej nefryny (H7toN: FAPQVENPTPLTK). Oba peptydy zidentyfikowano poprzez przeszukiwanie bazy danych widm MS / MS za pomocą MS-Tag w trybach identyczności i homologii (Figura 2). Rycina 3 Dwuwymiarowe żele zabarwione srebrem. Izolowany kłębuszek Sprague-Dawley inkubowano z mAb 5-1-6 lub RVG-1. Po przemyciu kompleks przeciwciało / antygen sieciowano DTSSP, a następnie rozpuszczono w detergencie i immunoprecypitowano kozim anty-mysim IgG związanym z agarozą. Osady zostały następnie rozdzielone przez elektroforezę żelową 2D w warunkach redukujących, a żele zabarwiono srebrem. Rejestrowano pH żelu elektroogniskowego, a wartości przedstawiono poniżej dolnego żelu. Mniejsze groty wskazują na wewnętrzną kontrolę tropomyozyny (pI 5,2; 33 000 kDa). Duża strzałka wskazuje plamkę o masie cząsteczkowej 185 kDa, pI 4,95 A 5.2, która jest specyficznie immunoprecypitowana przez mAb 5-1-6. Duży anionowy zabarwiony srebrem plamka poniżej markera 29 kDa reprezentuje łańcuch lekki IgG, a seria kationowych plamek poniżej markera 60 kDa to ciężki łańcuch IgG zarówno w mAb 5-1-6 jak i kontrolnym. Western blotting immunoprecypitatu mAb 5-1-6 z króliczym przeciwciałem przeciw paraliżowi. Ekstrakt kłębuszkowy Triton X-100 poddano immunoprecypitacji za pomocą mAb 5-1-6 lub RVG-1, a uzyskany osad rozdzielono przez SDS-PAGE w warunkach redukujących. Figura 4 pokazuje wyniki Western blot tego preparatu z przeciwciałem poliklonalnym antynefryny. To przeciwciało zostało podniesione przeciwko domenie cytoplazmatycznej mysiej nefryny, ale także identyfikuje ludzką i szczurzy nefrynę. Specyficzne pasmo było obecne przy 185 kDa w ścieżce mAb 5-1-6 (Figura 4a). Immunoprecypitacja kontrolnym mAb RVG-1 była ujemna (Figura 4a). Ponadto, analiza Western blot ekstraktu kłębuszkowego ujawniła dublet prążków nefryny, które zostały częściowo zubożone po immunoprecypitacji z mAb 5-1-6 (Figura 4b)
[patrz też: słód jęczmienny gdzie kupić, fundacja dantis, astra wrocław godziny otwarcia ]
[patrz też: jako synonim, mycie włosów szarym mydłem, wypadek przy pracy dokumenty ]

Posted in: Bez kategorii Tagged: jako synonim, mycie włosów szarym mydłem, wypadek przy pracy dokumenty

Partnerzy serwisu:



Zobacz tez:

Zależna od leptyny agregacja płytek i zakrzepica tętnicza sugerują mechanizm powstawania zakrzepicy w przebiegu otyłości ad 7

U myszy ob / ob i WT agregację płytek zwiększono przez preinkubację leptyną w najniższym badanym stężeniu (10 ng / ml), ale efekt był wyraźniejszy przy wyższych dawkach (np. 100 ng / ml). Natomiast agregacja ludzkich płytek krwi została wzmocniona tylko przez wyższe stężenia leptyny (100 i 500 ng / ml), zgodnie z poprzednim raportem ... [Read more...]

Indukcja regulatora sygnału cytokin SOCS3 / CIS3 jako strategia terapeutyczna w leczeniu zapalenia stawów ad 8

Nasze wstępne badania sugerowały, że inhibitor JAK2, AG490 (36), był skuteczny w modelu CIA. Przewidywalibyśmy lepszą skuteczność z inhibitorem swoistym dla JAK1. Alternatywne podejście polegające na zwiększaniu poziomów białka CIS3 może być również możliwe do zahamowania stanu zapalnego. Stwierdziliśmy, że poziomy białka CIS3 były regulowane nie tylko przez cytokiny, ale także przez wiele innych czynników, ... [Read more...]

Mediacja sygnalizacji ERK1 / 2 ratuje wrodzone wady serca w mysim modelu zespołu Noonana ad 5

Dlatego postawiliśmy hipotezę, że hiperaktywacja ERK1 / 2 wpływa na cykliczne lub proliferacyjne komórki kardiomiocytów. W sercach a-MHC Q79R widoczne było nasilone barwienie znacznikiem proliferacji komórek Ki-67, szczególnie w komorze niezagęszczonej (figura 6A) oraz w komórkach umiejscowionych na granicach przegrody międzykomorowej i tkanki tkanki przedsionkowo-komorowej (Figura 6B). . Jednak normalne poziomy Ki-67 zostały przywrócone w ... [Read more...]

DevURL

Polecane:

potykacze

Tags

anielskie smaki badanie synonim centrum medyczne białystok choroba synonim dantis dokumenty synonim fundacja dantis fundacje lublin gorączka cda jako synonim jednakże synonim mycie włosów szarym mydłem olej z ostropestu właściwości olej z siemienia lnianego powiększone serce przyczyny sanatorium nad morzem dla dzieci szybkowar czas gotowania słód jęczmienny gdzie kupić tatuowanie gałek ocznych wskazuje synonim wypadek przy pracy dokumenty zus dobrowolne ubezpieczenie zdrowotne

Copyright © 2019 Medyczna fundacja dantis.