Medyczna fundacja dantis

Nefritogenne mAb 5-1-6 jest skierowane na zewnątrzkomórkową domenę szczurzej nefryny ad

12 września 2019 by admin

W opisywanych tu badaniach wykazaliśmy, że reaktywne monoklonalne mAb 5-1-6 reaktywne wobec przepony szczelinowej identyfikuje zewnątrzkomórkową domenę nefryny, tym samym dokumentując znaczenie szczelinowo-przepony i jej składnika, nefryny, w regulacji permerelektywności kłębuszkowej . Metody Przeciwciała. Płyn puchlinowy zawierający mAb 5-1-6 wytworzono u myszy otrzymujących primant 2,6,10,14-tetrametylopentadekanu (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri, USA) i wstrzyknięto dootrzewnowo mysią hybrydomę IgG1 przygotowaną jak opisano wcześniej. (1). Ten płyn poddano 50% wytrącaniu siarczanem amonu, a frakcję bogatą w immunoglobulinę dializowano wobec PBS (0,9% NaCl w 10 mM buforze fosforanu sodu [pH 7,4]) przez 2 dni i przechowywano w temperaturze <80 ° C. Nieistotne mysie monoklonalne przeciwciało IgG1, RVG-1, traktowano w ten sam sposób i stosowano jako kontrolę. Przeciwciało królika do pełnej domeny cytoplazmatycznej mysiej nefryny zostało podniesione przez immunizację królików peptydem znakowanym heksahistydyną, wyrażonym w transformowanej Escherichia coli (11). Fragment cDNA mysiej nefryny kodujący końcowe aminokwasy COOH 155 amplifikowano za pomocą PCR, sklonowano kierunkowo do bakteryjnego wektora ekspresyjnego pRSETA (Invitrogen Corp., San Diego, California, USA) i transfekowano do E. coli. Wyrażone białko fuzyjne oczyszczono z zlizowanych bakterii na kolumnie z niklem i agarozą i zastosowano do immunizacji królików przez wstrzyknięcie domięśniowe. 50% precypitat siarczanu amonu wytworzono z surowicy odpornościowej po trzeciej immunizacji i dializowano wobec PBS przed użyciem w tych badaniach. Badania Western blotting wykazały, że ta antyserum specyficznie identyfikuje białko o masie cząsteczkowej 185 kDa w ekstraktach kłębuszkowych myszy, szczura i człowieka, a w mikroskopii immunoelektronowej lokalizuje się na bocznych powierzchniach procesów podocytów w szczelinach filtracyjnych (11). Jako kontrolę zastosowano normalną surowicę króliczą. Sprzężone z CY3 osiołowe anty-mysie IgG (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, Pennsylvania, USA) i skoniugowane z FITC kozie anty-królicze IgG (Sigma Chemical Co.) zostały użyte do mikroskopii immunofluorescencyjnej, a kojarzona z peroksydazą chrzanową (HRP). anty-mysie IgG (Southern Biotechnology Associates Inc., Birmingham, Alabama, USA) i skoniugowane z HRP kozie anty-królicze IgG (Sigma Chemical Co.) zastosowano do analizy Western blotting. Zwierząt. Normalne dorosłe szczury Wistar ważące 150 - 175 g zakupiono od Charles River Laboratories (Wilmington, Massachusetts, USA). W celu izolacji kłębuszków na dużą skalę zamrożone nerki Sprague-Dawley zakupiono od Pel Freez (Rogers, Arkansas, USA). Materiały. Wszystkie materiały zakupiono od Sigma Chemical Co., o ile nie zaznaczono inaczej. Przygotowanie materiału do sekwencjonowania białka i 2-wymiarowej elektroforezy żelowej. Identyfikacja antygenu 5-1-6 mAb była utrudniona przez brak reaktywności w analizie Western blot. Ponadto wstępne badania wykazały, że konwencjonalna immunoprecypitacja ekstraktów kłębuszkowych z mAb 5-1-6 nie dawałaby wystarczającej ilości materiału do analizy sekwencji peptydów. Aby przezwyciężyć te problemy, przyjęliśmy następującą procedurę. Pomysł opierał się na naszej powtarzanej obserwacji, że mAb 5-1-6 wiąże się z antygenem in situ w izolowanych kłębuszkach, gdzie można go łatwo wykryć technikami immunohistologicznymi (2). Dlatego też sądziliśmy, że jeśli ustabilizujemy kompleks antygen / przeciwciał nieprzepuszczalnym, rozszczepialnym chemicznym środkiem sieciującym, powinniśmy być w stanie wykryć zwiększony zakres mysich IgG związanych z antygenem, gdy kompleks zostanie rozstrzygnięty na SDS-PAGE pod nieredukowalnym warunki. Ponadto, poddając kompleks dwuwymiarowej (2D) elektroforezie żelowej w warunkach redukujących, sieciowanie ulegnie zakłóceniu, uwalniając antygen z ciężkich i lekkich łańcuchów IgG. Zastosowano nieprzepuszczalny środek sieciujący w celu uniknięcia ryzyka koprocesowania przypuszczalnych cytoplazmatycznych białek wiążących. Glomeruli wyizolowano przez przesiewanie różnicowe z 20 zamrożonych nerki szczurzego Sprague-Dawley. Po zablokowaniu 1% BSA w PBS z inhibitorami proteazy (PI) (1 mM fluorku fenylometylosulfonylu, 5 mg / ml inhibitora trypsyny sojowej, 4 mM N-etylomaleimidu i 5 mM chlorowodorku benzamidyny) przez godzinę w temperaturze 4 ° C, kłębuszki inkubowano z 2 mg / ml albo mAb 5-1-6 lub RVG-1 w buforze blokującym przez godzinę w temperaturze 4 ° C. Po 5 przemyciach w PBS / PI, kłębuszki inkubowano z chemicznym środkiem sieciującym ditiobis (sulfosukcynimidopropionianem) (1 mM DTSSP, Pierce Chemical Company, Rockford, Illinois, USA) przez 30 minut w temperaturze pokojowej. Reaktywne miejsca zgaszono dodając M Tris (pH 8,0) do końcowego stężenia 50 mM przez kolejne 15 minut. [więcej w: astra wrocław godziny otwarcia, anielskie smaki, wegetariańskie przekąski ] [patrz też: wskazuje synonim, choroba synonim, olej z siemienia lnianego ]

Posted in: Bez kategorii Tagged: choroba synonim, olej z siemienia lnianego, wskazuje synonim

Partnerzy serwisu:



Zobacz tez:

Postępy w diagnostyce i leczeniu rzadkich chorób

Rzadkie choroby są zwykle zaburzeniami genetycznymi, przewlekłymi i nieuleczalnymi o stosunkowo niskiej częstości występowania. Postępy w diagnostyce i leczeniu rzadkich chorób były stosunkowo powolne ponieważ ciężko jest namówić firmy do przeprowadzenia kosztownych badań,  z powodu braku wystarczającej motywacji do zysku. Jednak ze względu na uwagę rządu i społeczeństwa, a także na rozwój gospodarczy, rzadkie choroby ... [Read more...]

Mediacja sygnalizacji ERK1 / 2 ratuje wrodzone wady serca w mysim modelu zespołu Noonana ad 7

Q79R SHP2 wytworzono z cDNA WT SHP2 przy użyciu mutagenezy opartej na PCR. Następnie, WT i Q79R SHP2 umieszczono w promotorach a- i P-MHC i wygenerowano myszy Tg. Sekwencje PCR stosowane do genotypowania były następujące: sens 5 (3-GGTCATGCGTGTTAGGAAC-3 (3, antysensowny 5 (3 -TTGTCTGGTCCACCAAGGAATAC-3 .. Wszystkie linie Tg i myszy ukierunkowane na geny wykonywano w lub ... [Read more...]

Zależna od leptyny agregacja płytek i zakrzepica tętnicza sugerują mechanizm powstawania zakrzepicy w przebiegu otyłości ad 5

Czas krzepnięcia zmaltretowanej mysiej lub ludzkiej PPP w odpowiedzi na trombinę (0,5 U / ml) nie był zaburzony przez dodanie leptyny (nie pokazano), co sugeruje, że działanie leptyny było zależne od płytek krwi. Figura 4c pokazuje, że wpływ leptyny na mysią funkcję płytek krwi zależy od dawki. W tych eksperymentach powtórzono badania agregacji ADP (0,5 ... [Read more...]

DevURL

Polecane:

Ortodoncja Gdańsk

Tags

anielskie smaki badanie synonim centrum medyczne białystok choroba synonim dantis dokumenty synonim fundacja dantis fundacje lublin gorączka cda jako synonim jednakże synonim mycie włosów szarym mydłem olej z ostropestu właściwości olej z siemienia lnianego powiększone serce przyczyny sanatorium nad morzem dla dzieci szybkowar czas gotowania słód jęczmienny gdzie kupić tatuowanie gałek ocznych wskazuje synonim wypadek przy pracy dokumenty zus dobrowolne ubezpieczenie zdrowotne

Copyright © 2021 Medyczna fundacja dantis.