Medyczna fundacja dantis

Nefritogenne mAb 5-1-6 jest skierowane na zewnątrzkomórkową domenę szczurzej nefryny czesc 4

12 września 2019 by admin

Chociaż konwencjonalne techniki immunoprecypitacji nie izolowały wystarczającej ilości materiału do sekwencjonowania, podejrzewaliśmy, że mAb 5-1-6 był zdolny do wytrącenia pewnego antygenu po ekstrakcji. Wraz z dostępnością swoistego przeciwciała antynadrenaliny poszukiwaliśmy obecności nefryny w osadzie metodą Western blotting. Glomeruli izolowano przez przesiewanie różnicowe z 10 zamrożonych nerek i solubilizowano z 0,5% Tritonem X-100 w PBS (pH 7,4) zawierającym 0,1% BSA i PI przez 30 minut na lodzie. Po odwirowaniu supernatant oczyszczono za pomocą 50 .l G-agarozy białkowej (GIBCO BRL, Gaithersburg, Maryland, USA) przez godzinę w temperaturze 4 ° C. Oczyszczony supernatant inkubowano z 2 mg / ml mAb 5-1-6 lub RVG-1 przez noc w 4 ° C, a następnie przez 50 minut 50 .l agarozy białkowej G. Po odwirowaniu osad przemyto 5 razy PBS. Przemyte grudki i próbki przed i po strąceniu ekstraktu kłębuszkowego gotowano w buforze do próbek SDS zawierającym ditiotreitol przez 5 minut i wirowano, a 10 ul każdego supernatantu poddawano SDS-PAGE przy użyciu 7,5% lub 5% żelu. Po elektroblottingu do nitrocelulozy i blokowaniu w 4% odtłuszczonym mleku w PBS przez godzinę, błonę inkubowano z poliklonalnym przeciwciałem przeciwrefrynowym (rozcieńczenie 1: 1000 w odczynniku blokującym) przez godzinę w temperaturze pokojowej, a następnie przemyto 3 razy TBST. Królicze IgG wykrywano za pomocą sprzężonego z HRP koziej anty-króliczej IgG (rozcieńczenie 1: 5,000) przez godzinę. Po kolejnej serii płukań w TBST, immunoreaktywne białka wykryto przy użyciu techniki chemiluminescencyjnej. Autoradiografy skanowano do programu Adobe Photoshop 4.01 (Adobe Systems Inc., Mountainview, Kalifornia, USA), a densytometrię mierzono za pomocą oprogramowania NIH Image (wersja 1.61, National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, USA). Immunofluorescencja. Przebadano zmrożoną tkankę nerki od normalnych szczurów Wistar. W przypadku podwójnego znakowania immunofluorescencji pośredniej sekcje 5. M kriostatu blokowano 1% BSA w PBS przez 30 minut. Normalne krioprobówki nerki inkubowano sekwencyjnie z mAb 5-1-6 (1:50) i króliczą anty-nefryną (1: 200) przez godzinę każda. Po kilku przemyciach PBS, skoniugowane z CY3 osiołowe anty-mysie IgG (1: 800) i skoniugowane z FITC kozie anty-królicze IgG (1: 100) dodano sekwencyjnie przez godzinę każda. Brak spektralnego nakładania się i reaktywności krzyżowej drugorzędowych przeciwciał zweryfikowano przez wykluczenie odpowiedniego pierwszorzędowego przeciwciała. Skrawki badano za pomocą mikroskopii epifluorescencyjnej przy użyciu soczewki immersyjnej Nikon 40 × Plan Apo (Nikon Inc., Melville, New York, USA). Obrazy zostały przechwycone za pomocą kamery Spot CCD (Diagnostic Instruments, Inc., Sterling Heights, Michigan, USA) i wyeksportowane do programu Adobe Photoshop. Po zbudowaniu płyty kompozytowej uzyskano kolorowy wydruk przy użyciu drukarki termosublimacyjnej Kodak ColorEase. Wyniki Sieciowana immunoprecypitacja kompleksu mAb 5-1-6 / antygen. Figura pokazuje reprezentatywny Western blot dla mysich IgG usieciowanego immunoprecypitatu DTSSP po SDS-PAGE w warunkach nieredukujących. Na ścieżce mAb 5-1-6, mysie pasmo IgG jest identyfikowane przy 150 kDa, reprezentując nieskompleksowane mAb 5-1-6. Drugi, przesunięty w górę prążek jest również obecny na około 300 kDa w tym torze, który reprezentuje kompleks mAb 5-1-6 z jego antygenem. Prążek o masie 150 kDa jest również zidentyfikowany w ścieżce kontrolnej RVG-1, prawdopodobnie w wyniku nieswoistego wiązania kłębuszkowego. W przeciwieństwie do ścieżki 5-1-6 mAb nie ma jednak przesuniętego w górę kompleksu mysich IgG, co wskazuje, że kompleks 300 kDa jest wynikiem swoistej interakcji między mAb 5-1-6 i jego antygenem. Figura Reprezentatywna analiza Western blot dla mysiej IgG w usieciowanych immunoprecypitatach. Izolowany kłębuszek Sprague-Dawley inkubowano z mAb 5-1-6 lub RVG-1. Po przemyciu kompleks przeciwciało / antygen sieciowano DTSSP, a następnie rozpuszczono w detergencie i immunoprecypitowano kozim anty-mysim IgG związanym z agarozą. Osady rozdzielono przez nieredukujący 5% SDS-PAGE, poddano elektrotranslacji na nitrocelulozę, immunoblot z mysiej IgG i opracowano za pomocą techniki chemiluminescencyjnej. Mysie pasmo zawierające IgG jest widoczne przy 150 kDa na obu ścieżkach, zgodnie z nieskompleksowanym mysim mAb 5-1-6 lub RVG-1. Ponadto, pasmo jest specyficznie obecne w ścieżce IP mAb 5-1-6 przy około 300 kDa, co stanowi usieciowany kompleks mAb 5-1-6 i jego antygen. Analiza MS immunoprecypitatów mAb 5-1-6. Te same immunoprecypitaty, jak pokazano na Figurze 1, również rozdzielono przez SDS-PAGE i wybarwiono Coomassie Brilliant Blue R-250
[przypisy: powiększone serce przyczyny, anielskie smaki, miód gryczany zastosowanie ]
[hasła pokrewne: fundacja dantis, szybkowar czas gotowania, fundacje lublin ]

Posted in: Bez kategorii Tagged: fundacja dantis, fundacje lublin, szybkowar czas gotowania

Partnerzy serwisu:



Zobacz tez:

apteka 21 bystra

Już prawie dekadę uznano, że siła sygnału dostarczanego przez TCR określa, które cytokiny są wydzielane przez komórkę T (53). Komórka najwyraźniej mierzy powinowactwo w części poprzez synchronizację sprzężenia między TCR a kompleksem peptyd / MHC. Przy dłuższym zaangażowaniu, jakościowo inny kompleks TCR ma czas na formowanie i zakres. odpowiednio wzrasta fosforylacja łańcucha (54). Zmienione ligandy ... [Read more...]

Nowy transgeniczny mysi model do immunologicznej oceny szczepionek na bazie minigenu DNA na bazie antygenu rakowo-płodowego czesc 4

Grupy myszy C57BL / 6-CEA-A2Kb (n = 4) immunizowano trzy razy w odstępach 2-tygodniowych atenuowanym S. typhimurium z albo wektorami pHI-CAP1-6D, albo pHI-691. Myszy uśmiercono 2 tygodnie po ostatniej immunizacji, a izolowane splenocyty frakcjonowano na CD8 + lub CD8a. populacje. Każdą populację komórek stymulowano napromieniowanymi komórkami MC-38-CEA-A2Kb przez 5 dni.

Polipeptyd aktywujący cyklazę przysadki adenylanowej jest fizjologicznym inhibitorem aktywacji płytek krwi ad

Skromna stymulacja przez różne receptory płytkowe sprzężone z Gs u tych pacjentów wyzwala silną i szybką aktywację cyklazy adenylowej, tym samym antagonizując aktywację płytek krwi. Ponieważ stwierdziliśmy, że nadczynność Gs. ścieżka może prowadzić do fenotypu krwawienia (13), zbadaliśmy, jak częściowa trisomia 18p, która powoduje nadekspresję agonisty Gs PACAP i jest również związana z wyraźnym fenotypem ... [Read more...]

DevURL

Polecane:

play woman

Tags

anielskie smaki badanie synonim centrum medyczne białystok choroba synonim dantis dokumenty synonim fundacja dantis fundacje lublin gorączka cda jako synonim jednakże synonim mycie włosów szarym mydłem olej z ostropestu właściwości olej z siemienia lnianego powiększone serce przyczyny sanatorium nad morzem dla dzieci szybkowar czas gotowania słód jęczmienny gdzie kupić tatuowanie gałek ocznych wskazuje synonim wypadek przy pracy dokumenty zus dobrowolne ubezpieczenie zdrowotne

Copyright © 2021 Medyczna fundacja dantis.