Medyczna fundacja dantis

Nowy transgeniczny mysi model do immunologicznej oceny szczepionek na bazie minigenu DNA na bazie antygenu rakowo-płodowego ad 7

16 września 2019 by admin

Kolejną linię komórkową HLA-A2 +, B3, ustalono przez transformację PBMC ze zdrowego osobnika HLA-A2 + z EBV. Konstrukcja wektorów ekspresyjnych. Wektor ekspresyjny pCMV / ER / Myc zakupiono od Invitrogen. Konstrukcja wektorowa jest schematycznie przedstawiona na rysunku 1A. Opracowano następujące wektory ekspresyjne: pHI-myc, pHI-CAP1-6D-myc i pHI-691-myc, gdzie peptyd HIVtat reprezentuje RKKRRQRRR, peptyd CAP1-6D reprezentuje YLSGADLNL (17), a peptyd CEA691 reprezentuje IMIGVLVGV (15). . Wszystkie peptydy zostały zaprojektowane tak, aby były w ramce z epitopem myc. Konstrukty zostały potwierdzone przez sekwencjonowanie DNA w Bazie Podstawowej The Scripps Research Institute (La Jolla, Kalifornia, USA). Ekspresję peptydu wykazano metodą blottingu Western z przeciwciałem monoklonalnym anty-myc (Invitrogen). Po sprawdzeniu ekspresji peptydu kodon stop wprowadzono bezpośrednio przed sekwencjami epitopów myc. Uzyskane wektory, mianowicie pHI, pHI-CAP1-6D i pHI-691, zweryfikowano przez sekwencjonowanie i zastosowano do transformacji podwójnie atenuowanego S. typhimurium (damro; AroAa) do immunizacji. Pusty wektor pCMV również włączono do eksperymentów jako kontrolę. Transformacja S. typhimurium. Doustnie atenuowany S. typhimurium (damro; AroAa) transformowano plazmidami szczepionkowymi DNA przez elektroporację. W skrócie, świeżo przygotowane bakterie (1. 108), w fazie wzrostu midlora, zmieszano z plazmidem DNA (1 do 2 ug) na lodzie w kuwecie 0,1 cm i poddano elektroporacji przy 2,0 kV, 25 ° F i 100 |. Synteza peptydów. Peptyd CAP1-6D, o czystości powyżej 95% według HPLC, był prezentem od J. Schlom (National Cancer Institute, Bethesda, Maryland, USA). Peptyd CEA691 został zsyntetyzowany przez Multiple Peptide System (San Diego, California, USA) o czystości powyżej 93% według HPLC. Szczepionka doustna i prowokacja komórek nowotworowych. Grupy myszy C57BL / 6J-CEA-A2Kb (n = 7. 10) immunizowano trzy razy w odstępach 2-tygodniowych przez zgłębnik za pomocą 100. L PBS, który zawierał w przybliżeniu 5. 108 podwójnie zmutowanych S. typhimurium niosących pCMV, pHI, pHI-CAP1-6D lub pHI-691. Myszy prowokowano podskórnie w prawym boku z 5. 105 komórek raka okrężnicy MC-38-CEA-A2Kb 2 tygodnie po ostatniej immunizacji. Guzy podskórne monitorowano codziennie. Myszy uśmiercono 28 dni po prowokacji nowotworem, a masy nowotworów określono i porównano z ciężarami osobników kontrolnych. Test cytotoksyczności. Cytotoksyczność zmierzono standardowym testem uwalniania chromu-51 (51Cr), jak opisano wcześniej, z pewną modyfikacją (31). Pokrótce, splenocyty zebrano 2 tygodnie po ostatniej immunizacji i stymulowano in vitro przez napromieniowane (1000 Gy) komórki MC-38-CEA-A2Kb w 37 ° C przez 5 dni w RPMI 1640 uzupełnionym 10% FBS, L-glutaminą, 15 mM HEPES, nieistotne aminokwasy, pirogronian sodu, 2-ME i rekombinowana IL-2 w stężeniu 20 U / ml (PeproTech, Rocky Hill, New Jersey, USA). Splenocyty zebrano i rozdzielono z pożywką do oddzielania komórek Lympholyte-M (Cedarlane Laboratories Ltd., Hornby, Ontario, Kanada). Komórki docelowe znakowano 51Cr przez 1,5 godziny w temperaturze pokojowej i inkubowano z komórkami efektorowymi w różnych stosunkach komórek efektorowych do docelowych w 37 ° C przez 4 godziny. Procent docelowej lizy komórek docelowych obliczono za pomocą wzoru [(ES) / (TS)]. 100, gdzie E jest średnim eksperymentalnym uwalnianiem, S jest średnim spontanicznym uwalnianiem, a T jest średnim całkowitym uwalnianiem. Testy ELISPOT. Testy ELISPOT przeprowadzono z zestawem ELISPOT (BD Biosciences Pharmingen, La Jolla, Kalifornia, USA) zgodnie z instrukcjami dostarczonymi przez producenta. W skrócie, splenocyty izolowano 2 tygodnie po ostatniej immunizacji. Po lizie czerwonych krwinek za pomocą buforu do lizy ACK (Cambrex Bio Science, Walkersville, Maryland, USA), splenocyty ponownie zawieszono w końcowym stężeniu 2. 107, i 100. L tej zawiesiny inkubowano następnie ze 100. L pożywki z lub bez peptydów lub napromienionych komórek stymulatorów przez noc w 37 ° C na płytkach ELISPOT powleczonych anty-IFN-y. W niektórych przypadkach splenocyty stymulowano napromienionymi (1000 Gy) komórkami MC-38-CEA-A2Kb przez 5 dni, a następnie wykonywano testy ELISPOT. MACS i cytometria przepływowa. MACS przeprowadzono z użyciem anty-mysich sprzężonych kulek magnetycznych CD8 Ab (Miltenyi Biotec, Sunnyvale, Kalifornia, USA) zgodnie z instrukcjami producenta. Czystość frakcjonowanych populacji komórek sprawdzono za pomocą cytometrii przepływowej przy użyciu skoniugowanego z fikoerytryną (sprzężonego z PE) anty-mysiego CD8Ab. Cytometria przepływowa została przeprowadzona przy pomocy 1. 106 komórek w FACSCalibur (Becton Dickinson, San Jose, Kalifornia, USA) wyposażonych w program CellQuest
[patrz też: sanatorium nad morzem dla dzieci, powiększone serce przyczyny, szybkowar czas gotowania ]
[patrz też: tatuowanie gałek ocznych, badanie synonim, olej z ostropestu właściwości ]

Posted in: Bez kategorii Tagged: badanie synonim, olej z ostropestu właściwości, tatuowanie gałek ocznych

Partnerzy serwisu:



Zobacz tez:

Powielanie Rai1 powoduje fenotypy fizyczne i behawioralne w mysim modelu dup (17) (p11.2p11.2) ad 8

Liczbę interwałów zamrażania przeliczono na wartość procentową zamrożenia. Kontekstowe i CS testowe dane analizowano przy użyciu 1-drogowej (genotypowej) ANOVA. Statystyka. Dane uzyskane z otwartego pola, jasnego ciemnego, akustycznego zaskoczenia i kondycjonowanych testów strachu zanalizowano przy użyciu 1-drogowej (genotypowej) ANOVA. Dane o hamowaniu prepulacyjnym analizowano za pomocą dwuczynnikowej (ANOVA poziomu genotypu x przedwzmacniacza) z powtarzanymi pomiarami.

Polipeptyd aktywujący cyklazę przysadki adenylanowej jest fizjologicznym inhibitorem aktywacji płytek krwi ad 8

Potrzebne są dalsze badania, aby ocenić rolę potencjalnych elementów regulatorowych zlokalizowanych w regionie translokacji chromosomu 18p lub wykluczyć możliwość, że członkowie rodziny V: 3 i IV: 5 mają niezwykły mozaik chromosomowy, który odpowiadałby za ich pośredni fenotyp. Taki ukryty mozaik dla nadliczbowego chromosomu pochodnego w nośniku rodzinnej translokacji wzajemnej został wcześniej opisany u pacjenta z ... [Read more...]

Mediacja sygnalizacji ERK1 / 2 ratuje wrodzone wady serca w mysim modelu zespołu Noonana ad 7

Q79R SHP2 wytworzono z cDNA WT SHP2 przy użyciu mutagenezy opartej na PCR. Następnie, WT i Q79R SHP2 umieszczono w promotorach a- i P-MHC i wygenerowano myszy Tg. Sekwencje PCR stosowane do genotypowania były następujące: sens 5 (3-GGTCATGCGTGTTAGGAAC-3 (3, antysensowny 5 (3 -TTGTCTGGTCCACCAAGGAATAC-3 .. Wszystkie linie Tg i myszy ukierunkowane na geny wykonywano w lub ... [Read more...]

DevURL

Polecane:



Tags

anielskie smaki badanie synonim centrum medyczne białystok choroba synonim dantis dokumenty synonim fundacja dantis fundacje lublin gorączka cda jako synonim jednakże synonim mycie włosów szarym mydłem olej z ostropestu właściwości olej z siemienia lnianego powiększone serce przyczyny sanatorium nad morzem dla dzieci szybkowar czas gotowania słód jęczmienny gdzie kupić tatuowanie gałek ocznych wskazuje synonim wypadek przy pracy dokumenty zus dobrowolne ubezpieczenie zdrowotne

Copyright © 2021 Medyczna fundacja dantis.