Grupy myszy C57BL / 6-CEA-A2Kb (n = 4) immunizowano trzy razy w odstępach 2-tygodniowych atenuowanym S. typhimurium z albo wektorami pHI-CAP1-6D, albo pHI-691. Myszy uśmiercono 2 tygodnie po ostatniej immunizacji, a izolowane splenocyty frakcjonowano na CD8 + lub CD8a. populacje. Każdą populację komórek stymulowano napromieniowanymi komórkami MC-38-CEA-A2Kb przez 5 dni. Następnie przeprowadzono testy cytotoksyczności z komórkami T2 obciążonymi CEA691 jako celami. (A) Czystość każdej subpopulacji po MACS. (B) Cytotoksyczność każdej populacji komórek przy stosunku E / T 20: 1. (C) Cytotoksyczność populacji CD8 + przedstawiono przy różnych stosunkach E / T. Gdy komórki CD8 + zostały wzbogacone przez MACS, procent limfocytów T CD8 + wzrósł z około 30% w niefrakcjonowanej hodowli do ponad 90% w hodowli komórkowej CD8 +. Jednakże frakcja CD8 + nie wykazywała wyższych szybkości zabijania (Figura 4C) w porównaniu z niefrakcjonowanymi splenocytami (Figura 3A), prawdopodobnie z powodu wymogu CD8. Komórki T dla optymalnej proliferacji w hodowli komórkowej. Jedną z linii dowodów potwierdzających ten pogląd jest to, że hodowla frakcji CD8 + powodowała niższą ekspresję CD8 w porównaniu z niefrakcjonowanymi hodowlanymi splenocytami (dane nie przedstawione). Podsumowując, te dane wskazują, że szczepionka minigene pHI-CEA691 może skutecznie indukować ograniczoną HLA-A2c, specyficzną dla CEA691 odpowiedź CTL u podwójnie transgenicznych myszy CEA-A2Kb. Ochronna odporność przeciwko komórkom raka okrężnicy CEA-A2Kb. Ograniczone do HLA-A2a, specyficzne dla CEA691 CTL, indukowane przez szczepionkę DNA minigenezy pHI-691, rozpoznały i zabiły podwójnie transdukowane MC-38 CEA-A2Kb komórki mysiego okrężnicy, to znaczy komórki MC-38-CEA-A2Kb, których ekspresja powierzchniowa HLA-A2 i CEA jest przedstawiona na Figurze 5A (po lewej). Proces ten wykazano przez izolację splenocytów z myszy 2 tygodnie po ostatniej immunizacji i stymulowanie ich in vitro naświetlanymi komórkami MC-38-CEA-A2Kb przez 5 dni, a następnie testowanie ich w standardowych testach uwalniania 51Cr. Zgodnie z oczekiwaniem, splenocyty z grupy myszy immunizowanych szczepionką pHI-691 wykazały najbardziej skuteczne zabijanie cytotoksyczne komórek docelowych MC-38-CEA-A2Kb w porównaniu z grupami kontrolnymi pCMV, pHI i pHI-CAP1-6D (P <0,05). 0,0005, P <0,001 i P <0,005 przy stosunku E / T wynoszącym odpowiednio 100: [Figura 5B]). Ta zwiększona zdolność do zabijania wydaje się być ograniczona HLA-A2, ponieważ procent zabijania HLA-A2. Komórki MC-38-CEA (ekspresja HLA-A2 i CEA pokazana na Figurze 5A [po prawej]) lub macierzyste komórki docelowe MC-38 nie różniły się istotnie pomiędzy grupami eksperymentalnymi (P> 0,05 przy stosunku E / T wynoszącym 100: [Figura 5C i dane nie pokazane]). Podsumowując, dane te sugerują, że te komórki odpornościowe, które przypuszczalnie są ograniczone HLA-A2 i CTL specyficzne dla CEA691, indukowane przez szczepionkę pHI-691, są rzeczywiście zdolne do rozpoznawania i zabijania podwójnie transfekowanych komórek MC-38 CEA-A2Kb in vitro. Figura 5 Szczepionka minigenu DNA pHI-691 indukuje ograniczone zabijanie HLA-A2y komórek MC-38-CEA-A2Kb. (A) Ekspresja powierzchni HLA-A2 i CEA przez MC-38-CEA-A2Kb (po lewej) i MC-38-CEA (po prawej). Komórki nowotworowe przemyto i inkubowano z izotypowym kontrolnym Ab (cienkie przerywane linie), anty-HLA-A2 (cienkie linie ciągłe) lub anty-CEA (ciężkie linie ciągłe) i barwiono sprzężonym z PE (Fab.) 2 kozim . mysie Ig Ab. Grupy myszy C57BL / 6-CEA-A2Kb (n = 4) immunizowano trzy razy w odstępach 2-tygodniowych atenuowanym S. typhimurium zawierającym wskazane wektory. Myszy uśmiercono 2 tygodnie po ostatniej immunizacji i izolowane splenocyty stymulowano napromieniowanymi komórkami MC-38-CEA-A2Kb przez 5 dni. Następnie przeprowadzono testy cytotoksyczności z (B) MC-38-CEA-A2Kb lub (C) MC-38-CEA jako komórkami docelowymi. maksimum, maksimum. W celu przetestowania swoistości tej odpowiedzi immunologicznej, splenocyty izolowane z grupy zaszczepionych za pomocą pHI-691 stymulowano co tydzień napromienionymi komórkami MC-38-CEA-A2Kb. Komórki te, po ponownej stymulacji czterokrotnie, miały ponad 86% CD8 +, co wykazano za pomocą cytometrii przepływowej (Figura 6A). Te stymulowane komórki następnie zebrano i analizowano za pomocą testów uwalniania 51Cr przeciwko komórkom BLA pozbawionym lub obciążonym peptydem HLA-A2 +. W testach uwalniania 51Cr znacznie poprawiono skuteczność zabijania cytotoksycznego komórek B3 obciążonych CEA691; to znaczy, zaobserwowano znacznie wyższy procent zabijania przy niższych stosunkach E / T, przy czym specyficzność nadal jest utrzymywana, jak wskazuje niższy procent specyficznego zabijania nieobciążonych komórek B3 (Figura 6B). Figura 6 Protezy stymulacja komórkami MC-38-CEA-A2Kb prowadzi do zwiększenia CTL swoistych dla CLA691 wzbogaconych w HLA-A2a.
[podobne: badanie kału na pasożyty, konwerter jednostek długości, miód gryczany zastosowanie ]
[patrz też: centrum medyczne białystok, gorączka cda, anielskie smaki ]
