Nowy transgeniczny mysi model do immunologicznej oceny szczepionek na bazie minigenu DNA na bazie antygenu rakowo-płodowego

Brak odpowiednich modeli zwierzęcych utrudniał przedkliniczne badania przesiewowe i krytyczną ocenę skuteczności ludzkich szczepionek in vivo. Antygen CCcinoembryonic. A2Kb (CEAA A2Kb) – podwójnie transgeniczne myszy dostarczają biologicznie istotnego modelu przedklinicznych badań przesiewowych i krytycznej oceny skuteczności ludzkiej szczepionki CEA in vivo, zwłaszcza, że takie zwierzęta są obwodowo tolerancyjne wobec CEA. Ustaliliśmy użyteczność tego modelu, wykazując, że doustna szczepionka z minigenu DNA indukuje skuteczne anty-nowotworowe odpowiedzi CTL ograniczone do HLA-A2 (3, specyficzne dla CEA. To stwierdzenie jest poparte trzema liniami dowodowymi: (a) skuteczną odpowiedź CTL specyficzną dla CLA691 ograniczoną przez HLA-A2; (b) specyficzne zabijanie in vitro komórek raka okrężnicy MC-38 CEA-A2Kb; i (c) odporność ochronną indukowaną u szczepionych myszy przeciwko wyzwaniom tych komórek nowotworowych. Co ważne, obwodowa tolerancja komórek T przeciwko CEA u podwójnie transgenicznych myszy CEA-A2Kb została przerwana przez szczepionkę minigenową CEA691 (IMIGVLVGV). Podsumowując, podwójnie transgeniczne myszy CEA-A2Kb okazały się dobrymi kandydatami do testowania in vivo ludzkich szczepionek na bazie CEA. Wynik ten sugeruje potencjał tych szczepionek w przyszłym rozwoju ludzkiej szczepionki. Wskazano na możliwość wykorzystania niezmutowanych własnych antygenów jako celów do szczepień terapeutycznych, pod warunkiem, że takie antygeny są prezentowane w kontekście immunogennym; to znaczy, jako minigene DNA w bakteryjnym systemie nośnikowym. Wprowadzenie CD8 + CTL mają zdolność specyficznego rozpoznawania i zabijania komórek nowotworowych. Rozpoznają antygeny (Ag) w postaci krótkich peptydów, zazwyczaj o długości 8-10 aminokwasów, prezentowanych na powierzchni komórek przez cząsteczki MHC klasy I. Peptydy te, zwykle określane jako epitopy CTL, są generowane w cytozolu komórek po proteolitycznym przetwarzaniu antygenów przez proteasom (1). Podstawowym celem szczepionek przeciwnowotworowych jest wywoływanie odpowiedzi przeciwrakowych CD8 + CTL, które mogą wyniszczyć guzy i zapobiec ich nawrotowi. Szczepionki DNA zapewniają atrakcyjne podejście do tego celu, szczególnie, że szczepionki przeciwko samoantygenom nowotworowym, składające się albo z zabitych komórek nowotworowych, albo zrekombinowanych białek, okazały się nieskuteczne w dostarczaniu antygenu do ścieżki przetwarzania MHC klasy I Ag (2). W konsekwencji indukcja skuteczniejszej odpowiedzi immunologicznej swoistej wobec antygenu za pomocą szczepionek DNA wymaga nowych strategii optymalizacji projektu szczepionki, w tym nowatorskiego podejścia do dostarczania szczepionek i skutecznego przetwarzania antygenu. Takie strategie obejmują stosowanie doustnego systemu nośnikowego z atenuowanym szczepem Salmonella typhimurium (dam AroAa), który dostarcza DNA do wtórnych narządów limfatycznych (3, 4). Stosowanie szczepionek minigenowych jest atrakcyjnym podejściem ze względu na łatwość syntezy i manipulacji tymi szczepionkami. Ponadto, w przeciwieństwie do szczepionek zawierających całe geny, szczepionki minigenu mogą indukować odpowiedź immunologiczną przeciwko specyficznym epitopom Ag, unikając jednocześnie ingerencji niepowiązanych epitopów Ag. W konsekwencji, takie szczepionki są bardziej dogłębne w badaniach mechanizmów immunologicznych niż szczepionki DNA kodujące całe geny. Doniesiono, że strategia minigenu indukuje skuteczne odpowiedzi przeciwnowotworowe przez ograniczony epitopem analogu peptydu melan-A HLA-A2 (5) lub przez mysie limfocyty MHC klasy I H-2Db / Kbp epitopu czerniaka Ag (4). Antygen rakowo-płodowy (CEA), białko onkofalowe o względnej masie cząsteczkowej 180 000, uważany jest za skuteczny cel dla szczepionki DNA, ponieważ jest nadmiernie eksprymowany przez większość raków jelita grubego, żołądka i trzustki (6), przez 50% piersi nowotwory i 70% niedrobnokomórkowego raka płuca; w znacznie mniejszym stopniu wyraża się w normalnym nabłonku, a także w niektórych tkankach płodu (7). Ta zwiększona ekspresja CEA sprzyja również wzrostowi zrostów międzykomórkowych, które mogą przyczyniać się do przerzutów (8). Krążące CEA można również wykryć we krwi większości pacjentów z nowotworami CEA-dodatnimi i zastosowano je do monitorowania odpowiedzi na leczenie i progresję choroby. Z powodu nadmiernej ekspansji CEA na dużą liczbę nabłonkowych komórek nowotworowych, cały gatunek całego CEA. lub szczepionki oparte na peptydach CEA były przedmiotem badań kilku laboratoriów (9-12) i były wykorzystywane w badaniach klinicznych (13, 14). Ponadto, zidentyfikowano krótkie peptydy odpowiadające epitopom CTL ograniczonym przez HLA-A2 . pochodzącym z CEA i wykazano, że przyczyniają się do cytotoksyczności wobec komórek nowotworowych in vitro (9, 15, 16). Obserwacje te skłoniły nas do przyjęcia minigeńskiego podejścia do opracowywania szczepionek DNA specyficznych dla CEA zaprojektowanych w celu uzyskania optymalnej aktywności przeciwnowotworowej i uniknięcia indukcji odpowiedzi immunologicznych, które reagują krzyżowo z normalnymi komórkami. W tym celu wybrano dwa różne epitopy ograniczone przez HLA-A2 .: peptyd antygenowo-rdzeniowy 1. 6D (CAP1-6D) (YLSGADLNL) i CEA691 (IMIGVLVGV)
[więcej w: mycie włosów szarym mydłem, szybkowar czas gotowania, tatuowanie gałek ocznych ]
[podobne: jednakże synonim, zus dobrowolne ubezpieczenie zdrowotne, powiększone serce przyczyny ]