Medyczna fundacja dantis

Polipeptyd aktywujący cyklazę przysadki adenylanowej jest fizjologicznym inhibitorem aktywacji płytek krwi ad

1 września 2019 by admin

Skromna stymulacja przez różne receptory płytkowe sprzężone z Gs u tych pacjentów wyzwala silną i szybką aktywację cyklazy adenylowej, tym samym antagonizując aktywację płytek krwi. Ponieważ stwierdziliśmy, że nadczynność Gs. ścieżka może prowadzić do fenotypu krwawienia (13), zbadaliśmy, jak częściowa trisomia 18p, która powoduje nadekspresję agonisty Gs PACAP i jest również związana z wyraźnym fenotypem krwawienia, wpływa na czynność płytek krwi. Stwierdziliśmy, że PACAP jest naturalnym regulatorem aktywacji płytek krwi. Ta dość nieoczekiwana rola PACAP w hemostazie została dodatkowo potwierdzona u myszy z nokautem PACAP i myszy ze specyficzną wobec megakariocytów nadekspresją PACAP. Metody Generowanie i genotypowanie myszy z nadekspresją specyficzną dla megakariocytów w analizach PACAP i Southern blot. Mysi promotor GPIIb (rozciągający się od +23 do 508 względem miejsca początku inicjacji) został wycięty z plazmidu mGPIIb-pGL3 przez trawienie KpnI i BamHI i wstawiony do wektora PACAP-pcDNA3.1 strawionego KpnI-BamHI (Invitrogen Corp Carlsbad, Kalifornia, USA) przed mysim genem PACAP (15). Mysi gen PACAP amplifikowano z cDNA mózgu ze starterami mPACAP1R5a-GTAGCCGCTCGAGGATCTGCTACAAGTATGC-3. i mPACAP4F 5 (3-GTTAGCCGAATTCAGTTCAAGGTCTGGCTAG-3 (3, sekwencjonowano i wklonowano w miejsce EcoRI-XhoI wektora pcDNA3.1. Fragment KpnI-DraIII o 2,2 kb (GPIIb-PACAP) wycięto i oczyszczono do wstrzyknięcia zygoty. Promotor GPIIb został z powodzeniem zastosowany do ograniczenia ekspresji transgenu do linii komórek megakariocytarnych myszy (16). Transgeniczne myszy z nadekspresją PACAP wytworzono przez wstrzyknięcie zygoty do wirusa Friend białaczka, szczep B (FVB) zgodnie z wcześniej opublikowanymi procedurami (17, 18). Potomstwo transgeniczne zidentyfikowano za pomocą przeszukiwania PCR przy użyciu genomowego DNA wyekstrahowanego z próbek ogona. Zastosowano następującą parę primerów: mGPIIb1F 5a-TGGCCACATCACAGCATTCAAG-3. i mPACAP1R. Przeprowadzono analizę Southern blot, aby zidentyfikować założycieli; 40 .g genomowego DNA strawiono SacI (Fermentas GmbH, St. Leon-Rot, Niemcy), a cDNA PACAP zastosowano jako sondę. Produkcja przeciwciał poliklonalnych i monoklonalnych. Pierwotne monoklonalne przeciwciało anty-PACAP (PP1A4) i anty-PACAP, anty-regulator przeciwciał poliklonalnych G-sygnalizujących-2 (anty-RGS2) i przeciw-VPAC1 wytworzono w naszym laboratorium przez iniekcję odpowiednio myszy i królików z rekombinacją białka fuzyjne składające się z sekwencji peptydowej PACAP (1-38), kompletnej sekwencji VPAC1 lub N-końcowej części sekwencji RGS2, z których każdy sprzężony jest z S-transferazą glutationową. Te rekombinowane białka fuzyjne ulegały ekspresji w Escherichia coli i oczyszczane przez chromatografię powinowactwa na unieruchomionym glutationie (Amersham Biosciences AB, Uppsala, Szwecja). Pierwotne przeciwciała oczyszczono na kulkach z białkiem A-Sepharose (Amersham Biosciences AB) i kontrolowano pod kątem ich reaktywności względem rekombinowanych PACAP (1- . 38), VPAC1 lub RGS2 przez immunoblot. Agregacja płytek ludzkich. Krew była antykoagulowana za pomocą 3,8% (wag./obj.) Cytrynianu trisodowego (9: 1), a osocze bogate w płytki (PRP), otrzymane przez odwirowanie (150 g przez 15 minut), ponownie wirowano (3000 g przez 15 minut) w celu wytworzenia osocze ubogie w płytki krwi (cytrynian PPP-trisodowy). Na koniec liczba płytek krwi w PRP została dostosowana do 250 x 109 płytek na litr za pomocą PPP. Agregację płytek przeprowadzono na dwóch dwukanałowych agregometrach Chrono-Log (Chrono-Log Corp., Havertown, Pennsylvania, USA) przez równoczesne rejestrowanie czterech zapisów. Badania zahamowania agregacji przeprowadzono jak opisano wcześniej (13, 14) i obejmowały krzywe dawka-odpowiedź do stabilnego analogu prostacykliny i agonisty ilirrostu Gs (Ilomédine; 0. 5 ng / ml; Schering AG, Berlin, Niemcy), który został dodany do PRP na minutę przed indukcją agregacji kolagenem Horm (2 .g / ml, Nycomed Arzneimittel, Monachium, Niemcy). Wartość IC50 obliczono po dopasowaniu krzywej za pomocą oprogramowania InStat 2.03 (GraphPad Software Inc., San Diego, Kalifornia, USA). Wartości IC50. SD porównywano z tymi dla tego samego agonisty Gs na płytkach kontrolnych, badanych jednocześnie. In vivo działanie przeciwciał anty-PACAP na agregację płytek u myszy. Myszom FVB wstrzyknięto trzy razy podskórnie 200 .l poliklonalnego przeciwciała anty-PACAP, anty-RGS2 lub przeciw VPAC1 lub czterokrotnie 50 .g mAb anty-PACAP (PP1A4) w odstępie 3 dni pomiędzy iniekcjami. W 14 dniu po pierwszym zastrzyku krew pełna z dolnej żyły głównej myszy znieczulona przez dootrzewnowe wstrzyknięcie 60 mg / kg pentobarbitalu sodu została pobrana do 20 mg / ml hirudyny
[patrz też: ciąża miesiąc po miesiącu, lekarz medycyny pracy wrocław, smażenie na oliwie z oliwek ]
[więcej w: wypadek przy pracy dokumenty, tatuowanie gałek ocznych, badanie synonim ]

Posted in: Bez kategorii Tagged: badanie synonim, tatuowanie gałek ocznych, wypadek przy pracy dokumenty

Partnerzy serwisu:



Zobacz tez:

Anafilatoksyna C5a jest głównym regulatorem aktywujących względem hamujących FcyR w chorobie płuc indukowanej przez kompleks immunologiczny czesc 4

In vivo działanie stymulacji rhC5a i hamowanie C5aR w zapaleniu IC płuc. Biorąc pod uwagę zmniejszony fenotyp zmutowanych myszy C5aR wcześnie, a nie późno w alveolarnej migracji PMN, określiliśmy stymulujące działanie hamowania rhC5a i C5aR w reakcji płucnej Arthus we wczesnych punktach czasowych. Ocena zapalenia płuc po 4 godzinach ujawniła, że miejscowe dotchawiczne podanie rhC5a, ... [Read more...]

Polipeptyd aktywujący cyklazę przysadki adenylanowej jest fizjologicznym inhibitorem aktywacji płytek krwi ad 8

Potrzebne są dalsze badania, aby ocenić rolę potencjalnych elementów regulatorowych zlokalizowanych w regionie translokacji chromosomu 18p lub wykluczyć możliwość, że członkowie rodziny V: 3 i IV: 5 mają niezwykły mozaik chromosomowy, który odpowiadałby za ich pośredni fenotyp. Taki ukryty mozaik dla nadliczbowego chromosomu pochodnego w nośniku rodzinnej translokacji wzajemnej został wcześniej opisany u pacjenta z ... [Read more...]

Nowy transgeniczny mysi model do immunologicznej oceny szczepionek na bazie minigenu DNA na bazie antygenu rakowo-płodowego

Brak odpowiednich modeli zwierzęcych utrudniał przedkliniczne badania przesiewowe i krytyczną ocenę skuteczności ludzkich szczepionek in vivo. Antygen CCcinoembryonic. A2Kb (CEAA A2Kb) – podwójnie transgeniczne myszy dostarczają biologicznie istotnego modelu przedklinicznych badań przesiewowych i krytycznej oceny skuteczności ludzkiej szczepionki CEA in vivo, zwłaszcza, że takie zwierzęta są obwodowo tolerancyjne wobec CEA. Ustaliliśmy użyteczność tego modelu, wykazując, ... [Read more...]

DevURL

Polecane:

libido therapy cena

Tags

anielskie smaki badanie synonim centrum medyczne białystok choroba synonim dantis dokumenty synonim fundacja dantis fundacje lublin gorączka cda jako synonim jednakże synonim mycie włosów szarym mydłem olej z ostropestu właściwości olej z siemienia lnianego powiększone serce przyczyny sanatorium nad morzem dla dzieci szybkowar czas gotowania słód jęczmienny gdzie kupić tatuowanie gałek ocznych wskazuje synonim wypadek przy pracy dokumenty zus dobrowolne ubezpieczenie zdrowotne

Copyright © 2021 Medyczna fundacja dantis.