Jednak efekty fenotypowe zmiany liczby kopii genu RAI1 nigdy wcześniej nie były systematycznie oceniane. Nasze odkrycia, że zmiana liczby kopii Rai1 powoduje otyłość i cechy behawioralne, mają konsekwencje wykraczające poza rzadkie zespoły i warunki Mendla. Większość pacjentów z CGS ma wyjątkowe cechy behawioralne (8, 9, 29), co sugeruje, że zmiana liczby kopii genu, utrata lub przyrost kopii wewnątrz przearanżowanego interwału genomowego, może mieć kluczowe znaczenie dla manifestacji takich cech behawioralnych. Mikrodelecje powodujące takie zespoły często są otoczone duplikacjami segmentowymi lub powtórzeniami o niskiej liczbie kopii (LCR), które pośredniczą w delecji genomowej i przegrupowaniu duplikacji za pośrednictwem nierównoległej rekombinacji homologicznej (NAHR) (30). Genomowe segmentalne duplikacje stanowią około 5% ludzkiego genomu (31) i istnieje coraz więcej dowodów sugerujących, że taka architektura genomu może nie tylko być związana z podatnością na rearanżacje powodujące zaburzenia genomu, ale może również być zaangażowana w kopiowanie genów. zmienność liczby u osób zdrowych (32). Istnienie zmienności liczby kopii genów w ludzkim genomie (32. 34) może potencjalnie predysponować indywidualne behawioralne fenotypy lub specyficzne cechy osobowości i być może wpływać na zachowania specyficzne dla populacji. Nasze wyniki sugerują, że Rai1 może być jednym z takich genów. Metody Zwierzęta. Myszy Dp (11) 17 / + i Df (11) 17 / + znajdowały się na podłożu genetycznym C57BL / 6 Tyrc-Brd (odpowiednio N8 i N7), podczas gdy myszy Rai1 + /. Były w mieszanym C57BL / 6 Tyrc-Brd × tło genetyczne 129E5 / SvEvBrd (F2). W zależności od eksperymentów, heterozygotyczne myszy Dp (11) 17 / + krzyżowano z Df (11) 17 / + lub myszami Rai1 + / p, a powstałe szczepy genotypowano metodą Southern blotting lub PCR jak opisano wcześniej (21, 23). . Myszy trzymano 2. 5 na klatkę w pomieszczeniu z cyklem 12 godzin światła / 12 godzin ciemności (światła o 6 rano, wyłączono o godzinie 18) z dostępem do jedzenia i wody ad libitum. W badaniu Dp (11) 17 / Df (11) 17 10 Dp (11) 17 / Df (11) 17, 7 Df (11) 17 / +, 21 Dp (11) 17 / + i 12 nieokreślonych typowe myszy płci męskiej zostały ocenione. Do badania Dp (11) 17 / Rai1 (3 oceniano 21 Dp (11) 17 / Rai1a, 18 Dp (11) 17 / +, 17 myszy Rai1 + / y i 21 myszy z gatunku dzikich myszy kontrolnych. Bateria testów behawioralnych składała się z: (a) testu eksploracji w otwartym polu; (b) test światło-ciemność; (c) ocenę akustycznej reakcji przestrachu i wstępnego hamowania reakcji przestrachu; i (d) test warunkowy strachu Pawłowskiego. Wybór testów na akumulator był oparty na naszych poprzednich badaniach (22). Eksperymenty behawioralne przeprowadzono z wieloma partiami 5. 10 myszy. Ogólnie rzecz biorąc, testy behawioralne przeprowadzono w godzinach 9: 00-14: 00. Eksperymenty zostały przeprowadzone przez eksperymentatora oślepionego genotypami myszy. Wszystkie myszy miały 2 miesiące na początku testów behawioralnych. Wszystkie procedury testowania behawioralnego zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Ochrony Zwierząt i Zastosowań Baylor oraz zgodne z wytycznymi NIH. Aktywność lokomotoryczna w otwartym polu. Aktywność lokomotoryczną oceniano przez umieszczenie myszy w centrum przezroczystej areny pleksiglasu (40 x 40 x 30 cm) i pozostawienie jej do eksploracji przez 30 minut. Napowietrzne lampy żarowe zapewniały oświetlenie pomieszczenia o wartości około 800 lx na arenach testowych. Ponadto szum biały występował na poziomie około 55 dB na arenach testowych. Aktywność w otwartym polu została określona ilościowo za pomocą sterowanego komputerowo systemu optycznej aktywności zwierząt Digiscan (RXYZCM [nr 16], AccuScan Instruments Inc.) zawierającego 16 wiązek fotoreceptorów po każdej stronie areny, która dzieli arenę na 256 kwadratów o jednakowej wielkości . Całkowity dystans (aktywność lokomotoryczna), czas ruchu (w sekundach), prędkość ruchu (cm / s), aktywność pionowa (wzrost mierzony liczbą przerw w fotobramie) i odległość w centrum (odległość przebyta w centrum areny) zostały zarejestrowane . Odległość centrum została również podzielona przez całkowitą odległość, aby uzyskać stosunek odległości centrum / całkowitej odległości. Współczynnik odległości ośrodka / całkowitej odległości można wykorzystać jako wskaźnik reakcji związanych z lękiem (35). Dane zbierano w 2-minutowych odstępach podczas 30-minutowej sesji testowej. Dane dotyczące aktywności w polu otwartym dla całego 30-minutowego testu analizowano stosując ANOVA 1-drożną (genotypową). Eksploracja światła i ciemności. Jeden do trzech dni później myszy testowano w teście eksploracji światło-ciemność, który składa się z komory polipropylenowej (44 x 21 x 21 cm) nierównomiernie podzielonej na dwie komory za pomocą czarnej przegrody zawierającej mały otwór. Duża komora była otwarta i jasno oświetlona (800 lx), podczas gdy mała komnata była zamknięta i ciemna
[patrz też: szybkowar czas gotowania, słód jęczmienny gdzie kupić, mycie włosów szarym mydłem ]
[przypisy: dantis, dokumenty synonim, sanatorium nad morzem dla dzieci ]
