Medyczna fundacja dantis

Zależna od leptyny agregacja płytek i zakrzepica tętnicza sugerują mechanizm powstawania zakrzepicy w przebiegu otyłości ad

18 września 2019 by admin

Zwierzęta znieczulono przez dootrzewnowe wstrzyknięcie pentobarbitalu (Nembutal; 60 mg / kg) i wdychanie metoksyfluranu (Metofane, Schering-Plough Animal Health Corp., Union, New Jersey, USA) dostosowanego do utrzymywania częstości oddechów 60. 80 oddechów / min. Wszystkie czynności związane z opieką nad zwierzętami i procedury eksperymentalne były zgodne z Przewodnikiem dla opieki i użytkowania zwierząt laboratoryjnych, Departamentem Zdrowia, Edukacji i Opieki Społecznej i zostały zatwierdzone przez Komitet Badań nad Zwierzętami w Instytucie Badawczym Scripps. Uraz szyjny i zakrzepica. Męskie myszy WT, ob / ob i db / db, w wieku 6. 9 tygodni, poddano uszkodzeniu tętnicy szyjnej przy użyciu FeCl3, jak opisano wcześniej (19, 20). Pokrótce, lewą tętnicę szyjną znieczulonej myszy ostrożnie odsłonięto przez tępe rozcięcie i pasek 0,5 x 1,0 mm mm z Whatman nr. bibułę filtracyjną nasączoną 10% roztworem FeCl3 nałożono na powierzchnię naczynia na 3 minuty. Przepływ krwi w tętnicy szyjnej monitorowano przed i ponad 25 minut po urazie, jak opisano (19), i uważano, że całkowite zakrzepnięcie zakrzepowe występuje, gdy przepływ zmniejszył się do 0,0. 0,2 ml / min. W niektórych doświadczeniach, rekombinowana leptyna myszy (Peprotech Inc., Rocky Hill, New Jersey, USA); zawartość endotoksyny <0,1 ng / mg leptyny) podawano myszom przed uszkodzeniem, jak wskazano w tekście. Poziomy glukozy, insuliny i leptyny w surowicy. Glukozę w surowicy oznaczano enzymatycznie przy użyciu metody heksokinazy (Sigma Diagnostics, St. Louis, Missouri, USA), podczas gdy stężenia insuliny w surowicy mierzono za pomocą monoklonalnego testu immunologicznego anty-szczurzego insuliny połączonego z insuliną (Crystal Chem Inc., Chicago, Illinois, USA). ). Stężenie leptyny w surowicy określano za pomocą dwóch specyficznych testów immunologicznych anty-mysiej leptyny (R & D Systems Inc., Minneapolis, Minnesota, USA i Diagnostic Systems Laboratories Inc., Webster, Texas, USA, odpowiednio). Testy ELISA przeprowadzono w dwóch powtórzeniach dla każdej próbki. Przygotowanie płytek. Ludzkie płytki krwi przygotowano standardowymi procedurami z użyciem krwi poddanej antykoagulacji z użyciem kwaśnej dekstrozy. W celu wyizolowania mysich płytek krwi, z krwi znieczulonej myszy zebrano nakłucie serca za pomocą igły 25 G. Krew zebrano od pięciu do sześciu zwierząt dla każdego doświadczenia. Odwirowano ją przy 150 g przez 15 minut w temperaturze pokojowej i ostrożnie usunięto warstwę osocza bogatopłytkowego (PRP). Płytki krwi zliczono w spektrofotometrze przy długości fali 800 nm, rozcieńczono buforem Tyrodesa (5 mM HEPES, 2 mM MgCl2, 0,1% BSA i 0,1% D-glukozy) do standardowego stężenia 3 x 108 / ml i natychmiast wykorzystywane do eksperymentów agregacji przy użyciu ADP. Aby otrzymać przemyte płytki do badań agregacji za pomocą trombiny, dodano .M prostaglandyny E1 i U / ml apyrazy, po czym odwirowano przez 15 minut przy 500 g. Supernatant (osocze ubogie w płytki [PPP]) usunięto, a grudkę płytek delikatnie zawieszono ponownie w buforze soli fizjologicznej 1,4-piperazynodietanosulfonowej (PIPES) (0,15 M NaCl i 20 mM PIPES, pH 6,5) zawierającym apyrazę (1 U / ml) i prostaglandyny E1 (5 .M) i odwirowano przy 500 g przez 15 minut. Osadowane płytki ponownie zawieszono w buforze Tyrode a, policzono i rozcieńczono do stężenia 3 × 108 / ml. Agregacja płytek i krzepnięcie osocza. Badania agregacji płytek przeprowadzono na czytniku mikropłytek (21) przy użyciu oprogramowania do akwizycji danych SOFTmax Pro (Molecular Devices Corp., Sunnyvale, California, USA). W każdym dołku umieszczono 5 .l ADP lub roztworu trombiny w różnych stężeniach, a następnie dodano 95 .l świeżo przygotowanego PRP do badań ADP lub przemyte płytki do badań trombiny. Aby ocenić wpływ leptyny na agregację płytek, PRP inkubowano z różnymi stężeniami leptyny przez 5 minut w temperaturze pokojowej przed dodaniem do studzienek zawierających ADP lub trombinę. Odczyty były wykonywane co 30 sekund w okresie 5 minut przy długości fali 405 nm dla przemywanych płytek lub przy długości fali 560 nm dla PRP. Wszystkie badania agregacji płytek przeprowadzono trzykrotnie i powtórzono je co najmniej trzy razy z podobnymi wynikami. Zmiany w przepuszczalności światła w czasie wyrażono jako procent światła przepuszczalności PPP, przy czym transmisja nieprzetworzonego PRP służyła jako standard zerowy. Wykresy procentowej transmisji światła w funkcji czasu (ślady agregacji) zostały skonstruowane przy użyciu standardowych programów komputerowych. Aby przeprowadzić badania krzepnięcia, PPP człowieka lub myszy inkubowano z leptyną (100 ng / ml) przez 5 minut w temperaturze pokojowej przed dodaniem trombiny (0,5 U / ml). Próbkę ponownie zaszczepiono 2 mM CaCl2 bezpośrednio przed pierwszym odczytem mikropłytki (długość fali, 560 nm). Analiza statystyczna [patrz też: ciąża miesiąc po miesiącu, sanatorium nad morzem dla dzieci, konwerter jednostek długości ] [hasła pokrewne: dokumenty synonim, sanatorium nad morzem dla dzieci, wskazuje synonim ]

Posted in: Bez kategorii Tagged: dokumenty synonim, sanatorium nad morzem dla dzieci, wskazuje synonim

Partnerzy serwisu:



Zobacz tez:

Polipeptyd aktywujący cyklazę przysadki adenylanowej jest fizjologicznym inhibitorem aktywacji płytek krwi ad

Skromna stymulacja przez różne receptory płytkowe sprzężone z Gs u tych pacjentów wyzwala silną i szybką aktywację cyklazy adenylowej, tym samym antagonizując aktywację płytek krwi. Ponieważ stwierdziliśmy, że nadczynność Gs. ścieżka może prowadzić do fenotypu krwawienia (13), zbadaliśmy, jak częściowa trisomia 18p, która powoduje nadekspresję agonisty Gs PACAP i jest również związana z wyraźnym fenotypem ... [Read more...]

Mediacja sygnalizacji ERK1 / 2 ratuje wrodzone wady serca w mysim modelu zespołu Noonana ad 8

Produkty PCR analizowano po cyklach seryjnych w liniowym zakresie amplifikacji. Produkty załadowano na 2% żelu agarozowym, a obraz uzyskano za pomocą skanera Typhoon 9400 (Amersham, GE Healthcare). Względna ekspresja została znormalizowana do białka rybosomalnego L7 referencyjnego genu. Zestawy starterów były następujące: (a) primer przedsionkowy y-MHC (5a-ACCTACCAGACAGAGGAAGA-3a), starter odwrotny (5a-ATTGTGTATTGGCCACAGCG-3a); (b) przedni starter y-MHC (5a-ACCTACCAGACAGAGGAAGA), starter ... [Read more...]

Nefritogenne mAb 5-1-6 jest skierowane na zewnątrzkomórkową domenę szczurzej nefryny ad

W opisywanych tu badaniach wykazaliśmy, że reaktywne monoklonalne mAb 5-1-6 reaktywne wobec przepony szczelinowej identyfikuje zewnątrzkomórkową domenę nefryny, tym samym dokumentując znaczenie szczelinowo-przepony i jej składnika, nefryny, w regulacji permerelektywności kłębuszkowej . Metody Przeciwciała. Płyn puchlinowy zawierający mAb 5-1-6 wytworzono u myszy otrzymujących primant 2,6,10,14-tetrametylopentadekanu (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri, USA) i wstrzyknięto dootrzewnowo ... [Read more...]

DevURL

Polecane:

Å‚ÃÅ‚Åźko dzieciÄ™ce biaÅ‚e
swissmedicus.pl

Tags

anielskie smaki badanie synonim centrum medyczne białystok choroba synonim dantis dokumenty synonim fundacja dantis fundacje lublin gorączka cda jako synonim jednakże synonim mycie włosów szarym mydłem olej z ostropestu właściwości olej z siemienia lnianego powiększone serce przyczyny sanatorium nad morzem dla dzieci szybkowar czas gotowania słód jęczmienny gdzie kupić tatuowanie gałek ocznych wskazuje synonim wypadek przy pracy dokumenty zus dobrowolne ubezpieczenie zdrowotne

Copyright © 2021 Medyczna fundacja dantis.